《第一幕第一場─在叢林深處》
塔米諾王子被巨蛇嚇昏,醒來時發現一位捕鳥人"帕帕基諾",自稱巨蛇是他所殺,而其實是夜之后的三位侍女所為。她們拿出公主的肖像交給王子,請求他從大祭司薩拉斯妥手中救出公主,並將許配給他。王子見了肖像中的公主,唱出「畫像詠嘆調」:

三位侍女把魔笛交給王子,銀鈴交給捕鳥人,希望他們藉魔笛、銀鈴的法力,在三位仙童的引導下,能救回公主。
《第一幕第九場─在祭司城堡內》
大祭司薩拉斯妥的黑奴領班,正在鞭打公主時,帕帕基諾闖進來,領班被捕鳥人嚇跑後,捕鳥人認出公主,轉述王子的愛意,告之王子已來拯救她了,兩人逃離大廳。另一方面,迷途的王子遇到僧侶,被告知:不該輕信夜之后的話,只是想尋仇,而不是由美德和愛所驅使,怎可能得到所想要的?王子疑惑中不覺地吹起魔笛,引來萬獸與之共舞,而這笛聲也引來了捕鳥人與公主,黑奴領班和黑奴們也跟著出現,還好魔鈴解除了緊張氣氛。此時,大祭司薩拉斯妥出現,表示王子和公主還得經過更多的試煉,兩人才能結合在一起。
《第二幕─眾祭司開會的大廳》
祭司們決定讓王子接受美德的考驗:緘口、勇氣、定力。捕鳥人不甘願地陪王子開始進入試煉的殿堂。
另一景,夜之后強迫公主拿利刃殺大祭司,唱出花腔詠嘆調「地獄的仇恨在我心中燃燒」

夜之后離去後,黑奴奪過公主的短劍,威脅他,如不順從他,就要向大祭司密告,但公主寧死不從,正在危急時,大祭司出現,制止了黑奴並以慈祥的口氣安慰公主,勸她千萬不可犯錯,並且要她以愛心對待任何一個人。唱出「在這神聖的殿堂」

《舞台的景換成大廳》
與帕帕基諾配對的帕帕基娜化身又老又醜的老太婆登場,王子因接受考驗而不理睬公主。此時公主既困惑且傷心地唱出「愛的歡樂像朝露般消失」:

祭司感謝神明,並祝福王子的最後一個考驗順利完成,捕鳥人也搖鈴跳舞,自己一個人喝酒歡唱,希望趕快找到一位年輕可愛的妻子,因而唱出「如果有愛人或妻子該多好」:
老太婆拄著拐杖再度出現,要捕鳥人發誓愛她,否則永遠只能吃麵包喝白開水,捕鳥人無奈的答應,未料老太婆搖身一變,成為貌美的姑娘,兩人共譜愛曲,還計畫生一大堆的帕帕基諾和帕帕基娜。
最後,黑奴領班聯合夜之后想進攻神殿,破壞一切,然而在光明殿中被神力打下地獄,所有的人們為光明戰勝黑暗而歡呼,在熱鬧的大合唱中結束。